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Experimental Procedures for Supplemental Figure: Double-stranded Zic2 and Zic2 mutant decoy DNA were prepared by annealing complementary single strands with the follow sequences: 5′-TCTTGGGTGGTCTCCGGAGACCACCCAAGA (for Zic2 decoy) and 5′-TCTTGAGTGAACTCCGGAGTTCACTCAAGA (for Zic2M decoy) as a negative control (Mizugishi et al., 2001). We utilized unlabeled and also Texas-red-tagged oligonucleotides (Invitrogen) to monitor DNA entry into cells. The terminal four bases on either site of the molecule were linked by phosphorothioate esters for added stability. Retinal explants were exposed to serial concentrations (0, 10, 100, and 200 μM) of decoy DNA combined with serial concentrations of serum-free medium (SFM) plus Fungene 6 transfection reagent (Roche) and incubated for 1 hr 30 min at 37°C. The explants were then washed several times in SFM, plated on D-polylysine/laminin, and incubated at 37°C, and dissociated chiasm cells were added to the cultures 2 hr later. They were then immunolabeled with α-neurofilament and explant outgrowth quantified, as indicated in Experimental Procedures., Figure S1. Zic2 Is Necessary for Ventrotemproal (VT) RGCs to Respond Negatively to Cues from the Chiasm Midline In Vitro. (A) Retinal explants grown on dissociated chiasm cells and immunostained with α-neurofilament. Representative images of dorsotemporal (DT) (a–d) and VT (e–h) retinal explants that were untransfected (a and e) or incubated with lipofectamine (b and f), Zic2 decoy oligos (c and g), or Zic2-mutant-decoy oligos (d and h) and subsequently cocultured with dissociated chiasm cells. Scale bar: 100 μm. (B) Quantification of area occupied by axons of DT (black columns) or VT (white columns) retinal explants that were untransfected or incubated with lipofectamine, Zic2-decoy oligos, or mutant-Zic2-decoy oligos, and then cocultured with dissociated chiasm cells. Left panels and graph: transfection of Zic2-decoy oligos does not affect the outgrowth in DT neurites (p > 0.2). Right panels and graph: transfection of Zic2-decoy oligos leads to increased growth of VT neurites. (*p < 0.05 compared with VT explants incubated with the lipofection agent alone or transfected with Zic2M-decoy). Number above bars indicates number of explants., Peer reviewed

Analytical and spectral characterization data of all new compounds, NMR/NOESY interprotonic distances, and crystallographic data (CIF)., Peer reviewed

Los reyes visitaron la sede central del Instituto Cervantes, en Alcalá de Henares, para conocer las iniciativas desarrolladas en la promoción de la enseñanza del español y la difusión de la cultura en español en el mundo. Sofía de Grecia, reina consorte de España sentada firmando, mientras Juan Carlos de Borbón, rey de España habla con Jon Juaristi, director del Instituto Cervantes

Los reyes de España visitaron ayer la sede central del Instituto Cervantes, en Alcalá de Henares, para conocer las iniciativas desarrolladas en la promoción de la enseñanza del español y la difusión de la cultura en español en el mundo. Plano medio sentados a la mesa, de izquierda a derecha Juan Carlos de Borbón, rey de España; Sofía de Grecia, reina consorte de España; Jon Juaristi, director del Instituto Cervantes y Pilar del Castillo, ministra de Educación, Cultura y Deporte

De izquierda a derecha, en plano medio: Sofía, reina consorte de Juan Carlos I, rey de España; Juan Carlos I, rey de España; y Abel Matutes, ministro de Asuntos Exteriores, en la inauguración del Instituto Cervantes de El Cairo.

De izquierda a derecha, en plano medio, Juan Carlos I, rey de España; y Sofía, reina consorte de Juan Carlos I, rey de España, descubriendo la placa en la inauguración del Instituto Cervantes de El Cairo.

Plano general, de izquierda a derecha, José María Aznar López, primer ministro español, en el atril; Gerardus Johannes Wijer, ministro de Economía de los Países Bajos; José María Pons Irzazábal, embajador de España en los Países Bajos; y el Marqués de Tamarón, director del Instituto Cervantes, en la inauguración del Instituto Cervantes de Utrecht.

Plano general, de izquierda a derecha, Gerardus Johannes Wijer, ministro de Economía de los Países Bajos; José María Pons Irzazábal, embajador de España en los Países Bajos; José María Aznar López, primer ministro español; el Marqués de Tamarón, director del Instituto Cervantes; y Germán Gullón Palacio, director del Instituto Cervantes de Utrecht, en la inauguración del Instituto Cervantes de Utrecht.

El Príncipe de Asturias, Felipe de Borbón y Grecia, y el Príncipe de Marruecos, Sidi Mohammed ben Hassan el-Alaoui, visitan la sede del Instituto Cervantes en Alcalá de Henares. Plano general, de izquierda a derecha, Esperanza Aguirre y Gil de Biedma, ministra de Educación y Cultura; Sidi Mohammed ben Hassan el-Alaoui, Príncipe de Marruecos; Felipe de Borbón y Grecia, Príncipe de Asturias; y el Marqués de Tamarón, director del Instittuo Cervantes.

Plano medio, de izquierda a derecha, de Felipe de Borbón y Grecia, Príncipe de Asturias, dando la mano al Marqués de Tamarón, director del Instituto Cervantes; detrás, Sofía, Reina consorte de Juan Carlos I, Rey de España, durante la VI Reunión anual del Patronato del Instituto Cervantes en 1997.